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生物学论文_鉴别犬瘟热病毒野毒株与疫苗株双重
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摘要:文章目录 1 材料 1.1 病毒与检测样品 1.2 试剂盒 1.3 主要仪器 2 方法 2.1 引物的设计与合成 2.2 病毒基因组RNA的提取与浓度的测定 2.3 CDV野毒株一步法RT-PCR反应条件的优化及检测 2.4 CDV疫苗
文章目录
1 材料
1.1 病毒与检测样品
1.2 试剂盒
1.3 主要仪器
2 方法
2.1 引物的设计与合成
2.2 病毒基因组RNA的提取与浓度的测定
2.3 CDV野毒株一步法RT-PCR反应条件的优化及检测
2.4 CDV疫苗株一步法RT-PCR反应条件的优化及检测
2.5 CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR反应条件的优化及检测
2.6 特异性试验
2.7 敏感性试验
2.8 重复性试验
2.8.1 批内重复性试验
2.8.2 批间重复性试验
2.9 符合性试验
2.10 临床应用
3 结果与分析
3.1 病毒基因组RNA浓度的测定
3.2 CDV野毒株一步法RT-PCR检测
3.3 CDV疫苗株一步法RT-PCR检测
3.4 CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR检测
3.5 特异性试验
3.6 敏感性试验
3.7 重复性试验
3.8 符合性试验
3.9 临床应用
4 讨论
文章摘要:为了建立一种简单、快速鉴别检测犬瘟热病毒(CDV)野毒株与疫苗株的方法,试验根据GenBank中CDV野毒株与疫苗株H基因序列设计鉴别检测引物,建立鉴别CDV野毒株与疫苗株一步法RT-PCR,并验证该方法的特异性、敏感性、重复性及符合性;利用建立的鉴别CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR检测方法对2017—2020年采集于江苏省11个不同地市的505份发病犬喉拭子样品和病料样品进行检测,确定CDV野毒株与疫苗株双重一步法RT-PCR的临床适用性。结果表明:该方法对CDV野毒株、CDV疫苗株、CDV野毒株/疫苗株可分别扩增出477 bp、677 bp、477 bp/677 bp的特异性条带,而检测犬细小病毒(CPV)、犬腺病毒(CAV)、犬副流感病毒(CPIV)、犬冠状病毒(CCV)均为阴性;该方法的检测灵敏度为23.1 pg RNA;与RFLP方法的符合率为100%;批内重复性检测和批间重复性检测的结果完全一致;利用该方法检测505份临床样品,CDV野毒株和疫苗株的阳性率分别为8.91%和72.48%。说明建立的鉴别CDV野毒株与疫苗株一步法RT-PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性、准确性和临床适用性。
文章关键词:
论文作者:梅胜尧 张玉堂 张逸民 孙宝海 刘晶
论文DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.01.0257
论文分类号:S852.65
文章来源:《中国疫苗和免疫》 网址: http://www.zgymhmy.cn/qikandaodu/2022/0612/2494.html