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脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮树模
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摘要：0 引言 Introduction 系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种原因不明的自身免疫病，血清中出现自身抗体和免疫复合物，同时有严重肾小球肾炎[1]，至今还没有治疗系统性红斑狼
0 引言 Introduction
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种原因不明的自身免疫病，血清中出现自身抗体和免疫复合物，同时有严重肾小球肾炎[1]，至今还没有治疗系统性红斑狼疮的良好措施。在研究系统性红斑狼疮治疗方法上，建立合适的动物模型是一种较好的研究手段。近年来小鼠模型的研究对揭示系统性红斑狼疮发病原因、发病机制及探索治疗方法具有重要价值。树鼩的系统性红斑狼疮模型还没有相关研究，树鼩作为非人灵长类替代动物具有资源丰富、成本较低、与人类亲缘关系较近等优势，近年来受到越来越多的关注[2-4]。
系统性红斑狼疮最易累及的脏器是肾脏，狼疮肾炎表现为免疫复合物沉积在肾小球不同部位[5]。当狼疮肾炎不能控制时，最终将发展为晚期肾衰竭[6]。总的来说，环磷酰胺药物疗法能控制大部分狼疮性肾炎，但不能全部控制。因此，分析疾病的发病机制对提高系统性红斑狼疮的治疗效果是很重要的。
间充质干细胞是一类存在于脂肪、骨髓、肌肉等多种组织中，可多向分化并具有免疫调节作用的非造血干细胞[7]。成人间充质干细胞主要存在于骨髓中，构成造血微环境，调节造血干细胞的生长和分化。脐带间充质干细胞较骨髓间充质干细胞具有容易获得的优点，成为目前临床治疗的研究热点[8]。
系统性红斑狼疮发病的机制还不清楚，研究证实T 细胞免疫异常起着重要的作用，与疾病的发生发展和预后有较大关系。辅助性T 细胞17 型(T help cell 17，Th17)是近年来发现的一种新型CD4+效应性T 细胞，可分泌白细胞介素17，参与到固有免疫及适应性免疫应答中，在系统性红斑狼疮发病中起重要作用[9]。脐带间充质干细胞移植可下调系统性红斑狼疮患者的Th17 细胞水平，可能是脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮的有效机制之一[10]。Foxp3+调节性T 细胞是具有免疫抑制功能的CD4+T 淋巴细胞的一个亚群，在自身免疫性疾病、器官移植免疫耐受、抗肿瘤免疫及过敏性疾病中均发挥重要作用。在系统性红斑狼疮模型动物中可检测到IL-17D 基因表达明显升高[9]，Foxp3 基因表达明显降低[11]，还可检测到血清IgG 水平明显升高。CD4+CD25+T 细胞是调节性T 细胞的亚群之一，主要来源于胸腺，其功能主要与抑制自身反应性T 细胞的免疫反应、抑制传统T 细胞的活化及促进一些抑制性细胞因子的分泌等有关，对维持机体内环境稳定、肿瘤免疫监测、诱导移植耐受和自身免疫性疾病的发生发挥重要作用。系统性红斑狼疮患者外周血中Th17 细胞增加，CD4+CD25+T 细胞减少，因此外周血中IL-17 基因表达升高，Foxp3 基因表达降低。
近年来自身免疫病的发病率也呈上升趋势，系统性红斑狼疮是一个摆在人们面前的未能解决的难题，动物模型是一种较好的研究工具来助力遗传易感性和发病机制研究，利用树鼩模型可以控制环境因素对实验动物的影响，有利于弄清发病机制和找出致病性基因位点。该研究主要探讨脐带间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮的机制和疗效。
1 材料和方法 Materials and methods
1.1 设计 随机对照动物实验。
1.2 时间及地点 实验于2018 年6 月至2019 年6 月在中国人民解放军联勤保障部队第九二〇医院临床实验科完成。
1.3 材料
1.3.1 实验动物 60 只树鼩用于造模，普通级，雌性，10 周龄，体质量120-150 g；10 只树鼩用于细胞培养，普通级，雌性，15 周龄，体质量150-160 g。所有树鼩为中缅树鼩滇西亚种，购自中科院昆明动物所，实验动物机构许可证号为SYXK(军)2017-0051。实验步骤由解放军联勤保障部队第九二〇医院实验动物伦理委员会审批通过。
1.3.2 实验试剂和仪器 胎牛血清、DMEM/F12 培养基(BI 公司)；CD29-PE、CD44-FITC、CD34-FITC 以 及FITC 和PE 的 同型对照(BD 公司)；降植烷和脂多糖(Sigma 公司)；ELISA 板(康宁公司)；HRP 标记的兔抗猴IgG 抗体(Sigma 公司)；血RNA提取试剂盒(百泰克公司)；反转录试剂盒和定量PCR 试剂盒(Thermo 公司)；0.25%胰蛋白酶(BI 公司)；DiR(Sigma 公司)；小动物活体成像仪(Caliper Life Sciences 公司，型号：
IVIS Iuminar XR)。
1.4 实验方法
1.4.1 树鼩脐带间充质干细胞的分离培养和鉴定 收集进行剖腹产的树鼩脐带，用盐水冲洗，双抗浸泡，用小剪刀尽量将脐带剪碎，放入培养瓶中贴壁培养，两三天可出现贴壁细胞，换液，培养基为含体积分数为20%胎牛血清的DMEM/F12，待细胞长满可传代培养。第3 代树鼩脐带间充质干细胞用流式抗体标记，上流式细胞仪检测。抗体包括CD29-PE、CD44-FITC、CD34-FITC 以及FITC 和PE 的同型对照。
文章来源：《中国疫苗和免疫》 网址: http://www.zgymhmy.cn/qikandaodu/2021/0303/716.html